RLF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406295

Übersicht

RGL2 (Ral-Guaninnukleotid-Dissoziationsstimulator-ähnlich 2) kodiert einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor der Ras-Familie, der dabei hilft, die kleinen GTPasen RalA/RalB nachgeschaltet der Ras-Signalgebung zu aktivieren. Durch die Modulation des Ral-GTPase-Zyklus beeinflusst RGL2 MAPK- und PI3K-gekoppelte Signalausgänge, die das Zytoskelett-Remodeling, den Vesikeltransport, die Zellzyklusprogression und Stressantworten steuern. Eine veränderte Aktivität innerhalb der Ras–Ral-Signalgebung wurde in mehreren Gewebekontexten mit onkogener Transformation und Tumorzellinvasion in Verbindung gebracht, was RGL2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Verschaltung des Signalwegs macht. In menschlichen Zellmodellen ermöglicht die Perturbation von RGL2 die Untersuchung, wie die Auswahl von Ras-Effektoren proliferative und migratorische Phänotypen prägt und mit der Signalgebung von Rezeptor-Tyrosinkinasen zusammenwirkt.

Das RLF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RGL2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RGL2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RGL2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RLF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RGL2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RLF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RGL2-Exone abzielen, die für die RLF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RGL2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RLF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RLF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RGL2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RLF HDR-Plasmid (h) und RLF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RGL2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RGL2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.