RIP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401008-ACT

ヒトRIPK3は、プログラム細胞壊死（ネクロトーシス）および炎症性細胞死の中心的メディエーターである受容体相互作用型セリン／スレオニンプロテインキナーゼ3（RIP3）をコードする。RIP3は、デスレセプターや自然免疫経路からの上流シグナルを統合してMLKL駆動の膜破綻を活性化する一方、NF-κBシグナル伝達、インフラマソームとのクロストーク、代謝ストレス応答とも交差する。RIPK3活性の制御異常は、神経変性、虚血再灌流障害、感染に伴う免疫病態、がん生物学に関与する異常炎症や組織傷害メカニズムと関連づけられている。経路の結節点として、RIP3はアポトーシス、ネクロトーシス、生存促進シグナルの間で起こる文脈依存的なスイッチを解明するために、しばしば研究対象となる。

RIP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RIPK3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RIP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RIPK3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRIPK3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RIP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRIPK3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRIP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRIPK3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRIP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。