RIP140 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435290

Übersicht

Das Mausgen *Nrip1* kodiert RIP140 (NRIP1), einen ligandenabhängigen nukleären Rezeptor-Koregulator, der überwiegend als transkriptioneller Korepressor wirkt, indem er chromatinmodifizierende Komplexe wie HDAC-haltige Assemblies rekrutiert. RIP140 integriert Signale nukleärer Rezeptoren einschließlich PPARs, ER, TR und RXR, um Genprogramme zu modulieren, die die mitochondriale Funktion, den oxidativen Stoffwechsel, die Adipozytendifferenzierung und entzündliche transkriptionelle Outputs steuern. Über diese Signalwege wird *Nrip1* häufig zur Untersuchung der metabolischen Homöostase, des Energieverbrauchs und makrophagenvermittelter Entzündungsantworten eingesetzt. Eine fehlregulierte RIP140-abhängige transkriptionelle Kontrolle wurde in präklinischen Forschungssettings mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Adipositas, Insulinresistenz, die Biologie der Fettleber sowie hormonresponsive Tumormodelle relevant sind.

Das RIP140 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nrip1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nrip1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nrip1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RIP140-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nrip1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RIP140-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nrip1-Exone abzielen, die für die RIP140-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nrip1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RIP140 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RIP140 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nrip1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RIP140 HDR-Plasmid (m) und RIP140 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nrip1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nrip1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.