Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
RIP Double Nickase Plasmid (h): sc-400377-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RIP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RIP Double-Nickase-Plasmid (h) und RIP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RIPK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RIP: sc-133102
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RIP Double Nickase Plasmid (h) | sc-400377-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400377-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes RIPK1 (RIP) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die Signale aus dem TNF-Rezeptor- und aus Mustererkennungs-(Pattern-Recognition-)Signalwegen integriert, um entzündliche Signalgebung und Entscheidungen über programmierten Zelltod zu koordinieren. Durch die Assemblierung rezeptorassoziierter Komplexe reguliert RIPK1 die Aktivierung von NF-κB und MAPK sowie Apoptose und Nekroptose über Crosstalk mit der FADD–Caspase-8- und der RIPK3–MLKL-Signalgebung. Seine kinaseabhängigen und Gerüst-(Scaffold-)Funktionen prägen die Zytokinproduktion, angeborene Immunantworten und die Anpassung an zellulären Stress. Eine fehlregulierte RIPK1-Aktivität wurde mit Mechanismen entzündlicher und neurodegenerativer Erkrankungen sowie mit der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was RIPK1 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zur Kontrolle von Zellschicksalsentscheidungen macht.
RIP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RIPK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RIPK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RIPK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RIPK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.