Ribosomal Protein S13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406367

Übersicht

RPS13 kodiert das ribosomale Protein S13, eine essenzielle Komponente der kleinen 40S-Untereinheit des Ribosoms, die den Zusammenbau des Ribosoms, die rRNA-Prozessierung und die präzise mRNA-Decodierung während der Translation unterstützt. Über seine Rolle in der zytosolischen Proteinsynthese trägt RPS13 zur Kontrolle des Zellwachstums und zur Proteostase bei und ist mit Signalwegen verknüpft, die auf die Translationskapazität reagieren, einschließlich stressadaptiver und nukleolärer Überwachungsantworten. Störungen der Homöostase ribosomaler Proteine werden mit Ribosomopathien in Verbindung gebracht und wurden mit veränderten Proliferationsprogrammen assoziiert, wie sie in mehreren Krebs-Kontexten beobachtet werden, was RPS13 zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um zu untersuchen, wie translationaler Output den Zellzustand prägt. Als konservierter ribosomaler Faktor ist RPS13 zudem relevant für die Untersuchung globaler Translationsdynamiken, selektiver mRNA-Translation und der Folgen eines Ungleichgewichts der Ribosomenbiogenese.

Das Ribosomal Protein S13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RPS13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RPS13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RPS13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ribosomal Protein S13-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RPS13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ribosomal Protein S13-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RPS13-Exone abzielen, die für die Ribosomal Protein S13-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RPS13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ribosomal Protein S13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ribosomal Protein S13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RPS13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ribosomal Protein S13 HDR-Plasmid (h) und Ribosomal Protein S13 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RPS13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RPS13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.