Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein L5: sc-403453-ACT

RPL5 code la protéine ribosomique L5, un composant central de la grande sous-unité ribosomique 60S, qui se lie à l’ARNr 5S et l’escorte au cours de la biogenèse des ribosomes, tout en contribuant à la fidélité de la traduction. Au-delà de son rôle structural dans les ribosomes cytosoliques, RPL5 participe à l’homéostasie nucléolaire et relie le stress ribosomique à la régulation de la voie p53 via des interactions avec MDM2, influençant le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose. Une perturbation de RPL5 peut altérer la maturation des ARNr et la synthèse protéique globale, avec des effets sur les programmes de prolifération et de différenciation. Des altérations de la fonction ou du dosage de RPL5 ont été associées à des ribosomopathies et à une dérégulation translationnelle liée au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la protéostasie et de la signalisation du stress.

Ribosomal Protein L5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPL5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein L5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPL5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPL5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein L5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPL5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein L5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein L5 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPL5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.