Ribosomal Protein L5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403453-ACT

RPL5 kodiert das ribosomale Protein L5, einen Kernbestandteil der großen 60S‑Ribosomenuntereinheit, der während der Ribosomenbiogenese an die 5S‑rRNA bindet und sie begleitet sowie eine präzise Translation unterstützt. Über seine strukturelle Rolle in zytosolischen Ribosomen hinaus trägt RPL5 zur Homöostase des Nukleolus bei und verknüpft ribosomalen Stress über Interaktionen mit MDM2 mit der Regulation des p53‑Signalwegs, wodurch Zellzykluskontrolle und Apoptose beeinflusst werden. Störungen von RPL5 können die rRNA‑Prozessierung und die globale Proteinsynthese beeinträchtigen und damit Proliferations‑ und Differenzierungsprogramme beeinflussen. Eine veränderte Funktion oder Dosierung von RPL5 wurde mit Ribosomopathien und krebsassoziierter Fehlregulation der Translation in Verbindung gebracht, was es für Studien zu Proteostase und Stresssignalgebung relevant macht.

Ribosomal Protein L5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RPL5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ribosomal Protein L5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RPL5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RPL5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ribosomal Protein L5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RPL5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ribosomal Protein L5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ribosomal Protein L5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RPL5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.