Ribosomal Protein L39 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410990-ACT

RPL39 kodiert das ribosomale Protein L39, eine kleine, basische Komponente der großen 60S‑Ribosomenuntereinheit, die zur Ribosomenassemblierung sowie zu stabilen rRNA‑Protein‑Wechselwirkungen beiträgt, die für eine effiziente zytosolische Translation erforderlich sind. Als Teil der zentralen Translationsmaschinerie beeinflusst RPL39 die Proteostase und Zellwachstumsprogramme, die eng mit der mTOR‑Signalgebung, integrierten Stressantworten und der Ribosomenbiogenese verknüpft sind. Störungen in der Expression ribosomaler Proteine können Translationskapazität und ‑treue verschieben und dadurch die Synthese von Regulatoren verändern, die an der Zellzykluskontrolle und der Stressanpassung beteiligt sind. Eine dysregulierte Ribosomenbiogenese und Translation sind wiederkehrende Merkmale zahlreicher Krebserkrankungen und erblicher Ribosomopathien, wodurch RPL39 ein nützlicher Knotenpunkt ist, um zu untersuchen, wie translationaler Output krankheitsrelevante Phänotypen prägt.

Ribosomal Protein L39 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RPL39-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ribosomal Protein L39 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RPL39-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RPL39-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ribosomal Protein L39-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RPL39-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ribosomal Protein L39-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ribosomal Protein L39-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RPL39-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.