Plasmide Double Nickase (h) Ribosomal Protein L22: sc-417644-NIC

RPL22 code la protéine ribosomique humaine L22, un composant structural de la grande sous-unité ribosomique 60S qui contribue à coordonner l’architecture de l’ARNr et favorise une traduction efficace. Au-delà de son rôle central dans la biogenèse des ribosomes et la synthèse protéique, RPL22 a été associée à la régulation du traitement des ARNm et aux réponses au stress cellulaire, qui s’articulent avec des programmes de prolifération et de différenciation. Une altération de la dose ou de la fonction des protéines ribosomiques peut perturber le contrôle translationnel et l’homéostasie nucléolaire, des processus fréquemment étudiés dans le contexte de la biologie du cancer et des ribosomopathies. RPL22 est donc couramment étudiée pour sa contribution à la protéostasie, à la régulation du cycle cellulaire et aux vulnérabilités dépendantes du contexte résultant d’un dysfonctionnement du ribosome.

Ribosomal Protein L22 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RPL22 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RPL22. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RPL22. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RPL22.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.