Plasmide Double Nickase (h) Riboflavin kinase: sc-418359-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Riboflavin kinase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Riboflavin kinase Double Nickase (h) et le plasmide Riboflavin kinase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RFK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Riboflavin kinase Antibody (E-7): sc-398830
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Riboflavin kinase | sc-418359-NIC | 20 µg | $410.00 |
RFK code la riboflavine kinase, une enzyme cytosolique qui phosphoryle la riboflavine (vitamine B2) pour former le mononucléotide de flavine (FMN), première étape engagée de la biosynthèse des cofacteurs flaviniques. Le FMN est ensuite converti en FAD et soutient un large éventail de réactions d’oxydo-réduction dépendantes des flavoprotéines, essentielles au métabolisme oxydatif mitochondrial, à la β‑oxydation des acides gras et aux défenses antioxydantes cellulaires. En contrôlant la disponibilité intracellulaire en FMN/FAD, RFK contribue à coupler le statut vitaminique à l’homéostasie énergétique et à la gestion des espèces réactives de l’oxygène. Des perturbations du métabolisme des flavines ont été associées à des dysfonctionnements métaboliques et mitochondriaux, faisant de RFK une cible utile pour étudier la régulation, dépendante des nutriments, des voies redox et des réponses au stress.
Riboflavin kinase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RFK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RFK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RFK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RFK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.