Rho T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406496

Übersicht

RHOT2 kodiert Rho T2 (auch bekannt als Miro2), eine atypische GTPase der Rho-Familie, die in der äußeren Mitochondrienmembran verankert ist und zur Koordination von mitochondrialem Transport, Positionierung und Qualitätskontrolle beiträgt. Über Interaktionen mit Adapterproteinen, die Mitochondrien mit Mikrotubuli-Motorproteinen verbinden, unterstützt RHOT2 den zytoskelettabhängigen Transport und fördert die für energieintensive Zellbereiche erforderliche mitochondriale Verteilung. Rho T2 ist zudem an der calciumsensitiven Regulation der mitochondrialen Dynamik und des mitochondrialen Turnovers beteiligt und greift in Signalwege ein, die die mitochondriale Homöostase und Stressantworten steuern. Eine fehlregulierte RHOT2-Funktion wurde im Zusammenhang mit veränderter mitochondrialer Dynamik und Bioenergetik untersucht – Prozesse, die häufig mit Neurodegeneration und der krebsassoziierten metabolischen Reprogrammierung in Verbindung stehen.

Das Rho T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RHOT2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RHOT2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RHOT2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rho T2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RHOT2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rho T2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RHOT2-Exone abzielen, die für die Rho T2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RHOT2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rho T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rho T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RHOT2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rho T2 HDR-Plasmid (h) und Rho T2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RHOT2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RHOT2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.