Rho T1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401601

Übersicht

RHOT1 kodiert Rho T1 (Miro1), eine atypische GTPase der Rho-Familie, die in der äußeren Mitochondrienmembran verankert ist und Mitochondrien über Interaktionen mit TRAK-Adaptoren sowie Kinesin-/Dynein-Motoren an den mikrotubulusbasierten Transport koppelt. Durch die Integration der GTPase-Aktivität mit der Kalziumsensorik über EF-Hand-Domänen koordiniert Rho T1 den Transport, die Positionierung und den Turnover von Mitochondrien und beeinflusst damit neuronale Polarisierung, synaptische Funktion und die Verteilung von Energie. RHOT1 trägt außerdem zur Qualitätskontrolle der Mitochondrien bei, unter anderem über Crosstalk mit PINK1/Parkin-abhängigen Mitophagie-Signalwegen und durch die Regulation der Organellendynamik an Kontaktstellen zwischen ER und Mitochondrien. Eine Fehlregulation des RHOT1-abhängigen Transports und der Mitophagie wird mit zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht und häufig im Kontext von Neurodegeneration und anderen Erkrankungen untersucht, die durch mitochondriale Dysfunktion gekennzeichnet sind.

Das Rho T1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RHOT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RHOT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RHOT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rho T1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RHOT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rho T1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RHOT1-Exone abzielen, die für die Rho T1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RHOT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rho T1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rho T1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RHOT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rho T1 HDR-Plasmid (h) und Rho T1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RHOT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RHOT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.