Plásmido Doble Nickase (h) Rho GAP p190-B: sc-405755-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rho GAP p190-B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rho GAP p190-B (h) y el plásmido de doble nickasa Rho GAP p190-B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARHGAP5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rho GAP p190-B Anticuerpo (G-11): sc-393241
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rho GAP p190-B | sc-405755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rho GAP p190-B | sc-405755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP5 codifica la proteína activadora de GTPasas Rho p190-B, un regulador negativo clave de las GTPasas de la familia Rho que acelera la hidrólisis de GTP para frenar la señalización dependiente de RhoA. Mediante la modulación de la dinámica del citoesqueleto de actina, el recambio de las adhesiones focales y la contractilidad, p190-B influye en la forma celular, la adhesión, la migración y la citocinesis, integrando señales procedentes de las integrinas y de las vías de factores de crecimiento. La actividad de ARHGAP5 afecta a efectores aguas abajo como ROCK y la fosforilación de la cadena ligera de miosina, vinculando la señalización de Rho con la mecanotransducción y los programas de motilidad celular. La desregulación de la señalización de GTPasas Rho en la que participa ARHGAP5 se ha asociado con un comportamiento invasivo alterado y con una remodelación tisular aberrante en el cáncer y en otras patologías caracterizadas por un desequilibrio del citoesqueleto.
Rho GAP p190-B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARHGAP5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARHGAP5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARHGAP5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARHGAP5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.