Rho 7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404094-ACT

Das humane Gen **RND2** codiert **Rho 7**, eine atypische kleine GTPase der Rho-Familie, die den Umbau des Aktinzytoskeletts, das Neuritenauswachsen und die Membrandynamik durch Modulation von Rho-GTPase-Signalnetzwerken reguliert. Die Aktivität von Rho 7 beeinflusst Zellmorphologie, Migration und Adhäsion, indem sie mit Signalwegen interagiert, die die Kontraktilität des Zytoskeletts und den vesikulären Transport koordinieren. **RND2** wurde mit neurodevelopmentalen Programmen und neuronaler Differenzierung in Verbindung gebracht, und veränderte Expressionsmuster wurden in Kontexten beschrieben, in denen Zellmotilität und Überlebenssignale dysreguliert sind. Diese Eigenschaften machen Rho 7 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung zytoskelettabhängiger Prozesse und transkriptioneller Programme, die zelluläre Identität und Bewegung prägen.

Rho 7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RND2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rho 7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RND2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RND2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rho 7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RND2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rho 7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rho 7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RND2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.