Rheb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422675

Übersicht

Maus-Rheb kodiert eine Ras-verwandte kleine GTPase, die als zentraler Aktivator von mTORC1 an lysosomalen Membranen fungiert und Signale von Wachstumsfaktoren, die Erfassung von Aminosäuren sowie den zellulären Energiestatus integriert, um Proteinsynthese, Autophagie und Zellwachstum zu regulieren. Über den TSC1/TSC2-Komplex wird die Rheb-Aktivität streng durch PI3K–AKT-Signale und stressresponsive Einflüsse kontrolliert und prägt so den anabolen Stoffwechsel und die mitochondriale Homöostase. Eine fehlregulierte Rheb–mTORC1-Signalgebung wird mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, Tumorbiologie und metabolischer Umprogrammierung in Verbindung gebracht, weshalb Rheb häufig als Knotenpunkt zur Untersuchung von Nährstoffsignalwegen und Wachstumskontrolle genutzt wird. In murinen Systemen ermöglicht die gezielte Beeinflussung von Rheb mechanistische Studien zu mTOR-abhängigen Translationsprogrammen, lysosomenassoziierter Signalübertragung und Stressanpassung.

Das Rheb CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rheb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rheb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rheb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rheb-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rheb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rheb-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rheb-Exone abzielen, die für die Rheb-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rheb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rheb CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rheb CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rheb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rheb HDR-Plasmid (m) und Rheb HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rheb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rheb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.