RGS6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404102

Übersicht

RGS6 (Regulator of G protein signaling 6) kodiert ein GTPase-aktivierendes Protein, das die Beendigung der GPCR-Signalübertragung beschleunigt, indem es die GTP-Hydrolyse der Gα-Untereinheit fördert und dadurch Ausmaß und Dauer von cAMP/PKA- sowie anderen heterotrimeren G‑Protein-abhängigen Signalwegen mitbestimmt. Über die kanonische GPCR-Regulation hinaus wird RGS6 mit der Kontrolle zellulärer Stressantworten, der Mitochondrienfunktion und apoptotischer Signalgebung in Verbindung gebracht; zudem sind Rollen in der neuronalen und kardialen Physiologie beschrieben. Eine fehlregulierte RGS6-Aktivität oder -Expression wurde mit veränderter Neurotransmission und gestörter Signalhomöostase in Geweben assoziiert, in denen GPCR-Schaltkreise dominieren, was die Untersuchung in Modellen der Neurobiologie und kardiovaskulären Signalgebung unterstützt. Diese Funktionen machen RGS6 zu einem nützlichen Ziel, um das Rewiring von Signalwegen nachgeschaltet von GPCRs und G‑Protein-gekoppelten Effektoren zu untersuchen.

Das RGS6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RGS6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RGS6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RGS6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RGS6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RGS6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RGS6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RGS6-Exone abzielen, die für die RGS6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RGS6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RGS6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RGS6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RGS6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RGS6 HDR-Plasmid (h) und RGS6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RGS6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RGS6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.