RGNEF Double Nickase Plasmid (h): sc-404155-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RGNEF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RGNEF Double-Nickase-Plasmid (h) und RGNEF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARHGEF28 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RGNEF Double Nickase Plasmid (h) | sc-404155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RGNEF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF28 kodiert RGNEF, einen Rho-Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Rho-Familien-GTPasen aktiviert, um den Umbau des Aktinzytoskeletts, die Dynamik der Zelladhäsion und die gerichtete Migration zu koordinieren. Über die Kopplung an RhoA-abhängige Signalwege und nachgeschaltete Effektoren wie ROCK sowie Myosin-Kontraktilitätsmodule trägt RGNEF dazu bei, den Turnover fokaler Adhäsionen und die zytoskelettale Spannung fein abzustimmen. RGNEF besitzt zudem RNA-Bindeeigenschaften, die mit der Biologie von Stressgranula und der Regulation des mRNA-Schicksals in Verbindung gebracht wurden und damit zytoskelettale Signalgebung mit posttranskriptioneller Kontrolle verknüpfen. Eine Fehlregulation von ARHGEF28/RGNEF-assoziierten Signalwegen wurde u. a. im Zusammenhang mit veränderten Motilitätsprogrammen sowie neurodegenerationsrelevanten Mechanismen der RNA/Protein-Aggregation untersucht, was seine Eignung als Forschungsziel in Signalweg- und Phänotypstudien unterstreicht.
RGNEF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARHGEF28-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARHGEF28 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARHGEF28-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARHGEF28-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.