RFX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406040

Übersicht

RFX2 (regulatory factor X2) ist ein Winged-Helix-Transkriptionsfaktor, der an X-Box-Motive bindet und Genexpressionsprogramme koordiniert, die für die Ziliogenese und die Funktion motiler Zilien erforderlich sind. In menschlichen Zellen reguliert RFX2 Netzwerke, die das Andocken der Basalkörper, den Aufbau des Axonems und den intraflagellären Transport steuern, und verbindet es damit mit der Kopplung von Zellzyklus und Zilienbildung sowie der epithelialen Differenzierung. Eine Fehlregulation der Transkriptionsschaltkreise der RFX-Familie wurde mit zilienbezogenen Entwicklungsdefekten und reproduktiven Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit einer beeinträchtigten Biogenese motiler Zilien und von Flagellen vereinbar sind. Als transkriptioneller Regulator stromaufwärts zahlreicher struktureller und Transportgene der Zilien wird RFX2 häufig in Signalwegen untersucht, die die mukoziliäre Clearance, die Links-rechts-Musterbildung und die für die Spermatogenese relevante Genexpression steuern.

Das RFX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RFX2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RFX2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RFX2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RFX2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RFX2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RFX2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RFX2-Exone abzielen, die für die RFX2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RFX2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RFX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RFX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RFX2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RFX2 HDR-Plasmid (h) und RFX2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RFX2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RFX2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.