RFC4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403956

Descripción general

RFC4 (factor de replicación C, subunidad 4) es un componente central del complejo cargador de abrazadera RFC, que coloca PCNA sobre el ADN cebado, lo que permite una síntesis de ADN procesiva durante la replicación y coordina la reparación del ADN. Mediante sus interacciones impulsadas por ATPasa con PCNA y las ADN polimerasas, RFC4 favorece la progresión de la fase S, la estabilidad de la horquilla de replicación y las respuestas asociadas a los puntos de control frente al estrés replicativo. La alteración de RFC4 perturba la dinámica de la replicación del ADN y puede aumentar la inestabilidad genómica, vinculando la función del complejo RFC con vías que suelen estar alteradas en trastornos proliferativos. Como parte de la red más amplia de replicación y reparación del ADN, RFC4 se estudia con frecuencia en el contexto de la regulación del ciclo celular y las respuestas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RFC4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RFC4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RFC4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RFC4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RFC4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RFC4 para la investigación de la señalización de RFC4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RFC4 críticos para la función de RFC4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RFC4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RFC4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RFC4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RFC4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RFC4 (h) y el plásmido HDR RFC4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RFC4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RFC4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.