REP-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417782

Visão geral

CHML codifica a proteína 2 escolta de Rab (REP-2), uma chaperona citosólica que se liga a GTPases Rab recém-sintetizadas e as apresenta à Rab geranilgeraniltransferase para prenilação, uma modificação lipídica necessária para a associação à membrana. Por meio dessa etapa de maturação das Rab, a REP-2 sustenta vias de tráfego vesicular, incluindo o transporte entre endossomos e Golgi, a exocitose e a dinâmica de membranas relacionada à autofagia. A perturbação da prenilação das Rab ou do seu ciclo de atividade pode alterar a identidade de organelas e a triagem intracelular de cargas — processos frequentemente implicados em neurodegeneração, doenças da retina e fenótipos mais amplos de estresse celular ligados a defeitos de tráfego. O CHML também é estudado em contextos nos quais a sinalização dependente de Rab e a remodelação de membranas se cruzam com a função de células imunes e a biologia de células cancerosas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO REP-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CHML em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CHML, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CHML na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína REP-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CHML para a investigação da sinalização de REP-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CHML críticos para a função REP-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CHML para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo REP-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo REP-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CHML. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo REP-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR REP-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CHML para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CHML definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.