Rent3b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406904

Übersicht

UPF3B kodiert Rent3b, eine zentrale Komponente der Nonsense-vermittelten mRNA-Degradation (NMD), die die Integrität des Transkriptoms schützt, indem sie mRNAs mit vorzeitigen Stopcodons eliminiert und Teilmengen physiologischer Transkripte reguliert. Rent3b ist mit der an den Exon-Junction-Komplex (EJC) gekoppelten Überwachung assoziiert und interagiert mit NMD-Faktoren wie UPF2 und UPF1, um die Translationstermination mit einem gezielten RNA-Abbau zu verknüpfen. Durch diese Funktionen beeinflusst UPF3B die RNA-Qualitätskontrolle, die Homöostase der Genexpression sowie zelluläre Stressantworten, die mit fehlerhafter mRNA-Prozessierung zusammenhängen. Eine Störung der UPF3B-abhängigen NMD wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderten Expressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die für neurologische und andere mit dem RNA-Stoffwechsel assoziierte Erkrankungen relevant sind.

Das Rent3b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UPF3B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UPF3B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UPF3B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rent3b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UPF3B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rent3b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UPF3B-Exone abzielen, die für die Rent3b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UPF3B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rent3b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rent3b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UPF3B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rent3b HDR-Plasmid (h) und Rent3b HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UPF3B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UPF3B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.