Plásmido Doble Nickase (m) Rent1: sc-422649-NIC

Upf1 (Rent1) de ratón codifica una helicasa de ARN dependiente de ATP que es central para la degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (NMD), una vía conservada de vigilancia del ARN que reconoce codones de terminación prematuros y promueve la degradación de transcritos aberrantes. UPF1 se coordina con factores de terminación de la traducción y proteínas SMG para desencadenar la remodelación de los mRNP, la degradación del ARN y la regulación del control de calidad del transcriptoma. Más allá de la NMD canónica, UPF1 contribuye al recambio de ARNm, a las respuestas al estrés de replicación y a la estabilidad genómica mediante interacciones con redes de procesamiento de ARN y de respuesta al daño en el ADN. La actividad desregulada de UPF1 se ha vinculado con cambios en la proteostasis y en la señalización de estrés en modelos de disfunción del neurodesarrollo, biología del cáncer y regulación inflamatoria, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos centrados en vías.

Rent1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Upf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Upf1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Upf1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Upf1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.