Plasmide CRISPR d'Activation (h) Renin Receptor: sc-402411-ACT

ATP6AP2 code le récepteur humain de la rénine (également appelé récepteur de la (pro)rénine), une protéine membranaire multifonctionnelle qui participe au système rénine–angiotensine en se liant à la rénine et à la prोरénine et en modulant la signalisation en aval de manière indépendante de la production d’angiotensine. Au-delà de la signalisation hormonale, ATP6AP2 s’associe au complexe V‑ATPase (H+-ATPase vacuolaire) et contribue à l’acidification endosomale/lysosomale, au trafic des récepteurs et à l’homéostasie cellulaire, avec des liens rapportés avec la régulation de la voie Wnt/β-caténine. Par ces fonctions, le récepteur de la rénine influence des processus tels que la croissance cellulaire, les réponses au stress et le remodelage tissulaire. Une expression ou une fonction dérégulée d’ATP6AP2 a été associée à des phénotypes cardio-rénaux et métaboliques, et a également été étudiée dans des contextes incluant la fibrose, la signalisation liée à l’hypertension et la biologie tumorale.

Renin Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATP6AP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Renin Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATP6AP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATP6AP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Renin Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATP6AP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Renin Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Renin Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de ATP6AP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.