RelB Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422643-ACT

Relb codifica RelB, um membro da família NF-κB/Rel que atua como um fator de transcrição central para a via não canônica de NF-κB. RelB comumente forma heterodímeros com p52 para regular programas gênicos que controlam a diferenciação de células imunes, a apresentação de antígenos, a organogênese linfoide e a sinalização inflamatória a jusante de receptores como BAFFR, CD40 e o receptor de linfotoxina-β. Em sistemas murinos, a atividade de RelB influencia a maturação de células dendríticas e a comunicação cruzada entre estroma e sistema imune, moldando redes de citocinas e quimiocinas que coordenam a homeostase tecidual. A transcrição dependente de RelB desregulada tem sido implicada em ativação imune aberrante e estados inflamatórios crônicos, tornando o Relb um nó útil para a investigação de vias e redes transcricionais.

RelB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Relb sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RelB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Relb em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Relb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RelB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Relb nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RelB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RelB em células tumorais com expressão de Relb silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.