RELA/NFκB p65 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400004-LAC

RELA codifica la subunità p65 (RelA) di NFκB, un fattore di trascrizione centrale che integra segnali provenienti dai recettori per le citochine, dai recettori di riconoscimento di pattern, dai recettori dell’antigene e dalle vie di risposta allo stress cellulare. In seguito alla degradazione di IκB, p65 trasloca nel nucleo per regolare geni che controllano infiammazione, immunità innata e adattativa, sopravvivenza cellulare, proliferazione e differenziamento. L’attività di NFκB p65 è modulata da modificazioni post-traduzionali e dal crosstalk con vie quali TNF, IL-1, TLR, MAPK e JAK/STAT, che affinano gli output trascrizionali. Una segnalazione RELA deregolata è associata a stati infiammatori cronici ed è spesso implicata in programmi oncogenici che potenziano sopravvivenza, evasione immunitaria e resistenza alle terapie in diversi contesti tumorali.

Le particelle di attivazione lentivirale RELA/NFκB p65 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RELA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RELA/NFκB p65 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RELA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RELA/NFκB p65. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RELA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.