Plasmide CRISPR/Cas9 KO Reg IIIγ (h): sc-418109

Présentation

REG3G code pour la protéine Regenerating islet-derived protein 3 gamma (Reg IIIγ), une protéine antimicrobienne sécrétée de type lectine C, impliquée dans la défense de la barrière épithéliale et la régulation de l’immunité innée au niveau des surfaces muqueuses. Reg IIIγ reconnaît des glycannes de la paroi cellulaire bactérienne et contribue au contrôle de la colonisation microbienne, reliant ainsi son activité aux interactions hôte–microbiome et à la signalisation inflammatoire dans le tractus gastro-intestinal. Son expression est généralement inductible via des voies dépendantes des cytokines, notamment la signalisation IL‑22/STAT3, et peut être modulée en aval de l’activation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) et des réponses associées à NF‑κB. Une expression dérégulée de REG3G a été associée à une immunité muqueuse altérée et à des phénotypes liés à l’inflammation, ce qui étaye son utilisation comme nœud fonctionnel dans les études portant sur la dysfonction de barrière et les mécanismes de maladies à médiation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Reg IIIγ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène REG3G dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du REG3G, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert REG3G à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Reg IIIγ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en REG3G pour l'étude de la signalisation de Reg IIIγ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de REG3G essentiels à la fonction de Reg IIIγ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de REG3G pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Reg IIIγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Reg IIIγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus REG3G. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Reg IIIγ plasmide HDR (h) et le Reg IIIγ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie REG3G pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles REG3G définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.