Reg IIIγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418109

Übersicht

REG3G kodiert das aus regenerierenden Inselzellen abgeleitete Protein 3 Gamma (Reg IIIγ), ein sezerniertes, C‑Typ-Lektin-ähnliches antimikrobielles Protein, das an der Abwehr der epithelialen Barriere und der Regulation der angeborenen Immunantwort an mukosalen Oberflächen beteiligt ist. Reg IIIγ erkennt Glykanstrukturen in bakteriellen Zellwänden und trägt zur Kontrolle der mikrobiellen Kolonisierung bei; damit ist seine Aktivität mit Wirt–Mikrobiom-Interaktionen und inflammatorischer Signalgebung im Gastrointestinaltrakt verknüpft. Die Expression ist häufig über zytokinvermittelte Signalwege induzierbar, einschließlich der IL‑22/STAT3-Signalgebung, und kann nachgeschaltet an die Aktivierung von Mustererkennungsrezeptoren sowie an NF‑κB-assoziierte Antworten moduliert werden. Eine dysregulierte REG3G-Expression wurde mit veränderter mukosaler Immunität und entzündungsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als funktionellen Knotenpunkt in Studien zu Barrierestörungen und immunvermittelten Krankheitsmechanismen stützt.

Das Reg IIIγ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des REG3G-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des REG3G-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von REG3G nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Reg IIIγ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von REG3G-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Reg IIIγ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf REG3G-Exone abzielen, die für die Reg IIIγ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere REG3G-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Reg IIIγ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Reg IIIγ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des REG3G-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Reg IIIγ HDR-Plasmid (h) und Reg IIIγ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von REG3G-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten REG3G-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.