Ref-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400932-LAC

APEX1 codifica o fator redox-1 (Ref-1/APE1), uma proteína multifuncional que atua como um nó central ligando o reparo por excisão de bases à regulação redox da transcrição. Como uma endonuclease apurínica/apirimidínica, a Ref-1 processa sítios abásicos gerados durante danos oxidativos e por alquilação, coordenando a síntese de reparo subsequente para preservar a estabilidade do genoma. Por meio de sua atividade redox, a Ref-1 modula a ligação ao DNA de fatores de transcrição envolvidos em sinalização de estresse, inflamação e decisões de destino celular, incluindo AP-1, NF-κB, HIF-1 e p53. A atividade e a expressão desreguladas de APEX1/Ref-1 têm sido associadas a respostas alteradas a danos no DNA e a programas de adaptação redox observados em diversos modelos de biologia do câncer, neurodegeneração e doenças inflamatórias.

As Partículas de Ativação Lentivirais Ref-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de APEX1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Ref-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição APEX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Ref-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo APEX1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.