RBPMS CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403369-ACT

RBPMS (RNA-bindendes Protein mit multiplem Spleißen) ist ein zytoplasmatisches RNA-bindendes Protein, das U-reiche Elemente erkennt, um die posttranskriptionelle Genexpression zu regulieren, einschließlich RNA-Stabilität, Lokalisation und alternativem Spleißen. Es wird häufig als Marker für die Identität vaskulärer glatter Muskelzellen und retinaler Ganglienzellen verwendet und ist an Programmen beteiligt, die die Organisation des Zytoskeletts, Motilität und Differenzierung steuern. Durch die Modulation des RNA-Schicksals beeinflusst RBPMS transkriptionelle und Signalnetzwerke, die Zellzustandsübergänge und Stressantworten prägen. Eine veränderte RBPMS-Expression wurde in verschiedenen Kontexten beschrieben, die für vaskuläres Remodeling, Fibrose und Tumorzell-Phänotypen relevant sind, was seine Untersuchung im Zusammenhang mit krankheitsassoziierter zellulärer Plastizität unterstützt.

RBPMS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RBPMS-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RBPMS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RBPMS-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RBPMS-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RBPMS-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RBPMS-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RBPMS-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RBPMS-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RBPMS-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.