Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
RBP-Jκ Double Nickase Plasmid (m): sc-422626-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RBP-Jκ Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RBP-Jκ Double-Nickase-Plasmid (m) und RBP-Jκ Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rbpj abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RBP-Jκ: sc-271128
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RBP-Jκ Double Nickase Plasmid (m) | sc-422626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBP-Jκ Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rbpj kodiert RBP-Jκ, einen sequenzspezifischen, DNA-bindenden Transkriptionsfaktor, der als zentraler nukleärer Effektor des kanonischen Notch-Signalwegs fungiert. Nach Aktivierung des Notch-Rezeptors wechselt RBP-Jκ durch Rekrutierung von NICD und Koaktivatoren von einem transkriptionellen Repressor zu einem Aktivator und reguliert Gene, die Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Differenzierung steuern. In Mausmodellen sind RBP-Jκ-abhängige Programme entscheidend für Hämatopoese, Neurogenese und die Entwicklung von Immunzellen; zudem wird eine Fehlregulation der Notch–RBP-Jκ-abhängigen Transkriptionsausgänge häufig als mechanistischer Rahmen zur Untersuchung onkogener Transformation und entwicklungsbiologischer Phänotypen herangezogen. Als Knotenpunkt, der Notch-Signale mit Chromatin- und Transkriptionskontrolle verknüpft, wird Rbpj umfassend in Signalwegen untersucht, die die Aufrechterhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen und die Festlegung von Zelllinien steuern.
RBP-Jκ Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rbpj-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rbpj abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rbpj-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rbpj-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.