RBM25 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407825-ACT

O RBM25 humano codifica um regulador de splicing ligante de RNA que se associa ao spliceossomo para influenciar o processamento alternativo do pré-mRNA, a seleção de éxons e a maturação do mRNA. Ao controlar o equilíbrio entre isoformas de transcritos, o RBM25 contribui para o controle de qualidade do RNA e para programas a jusante que afetam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a expressão gênica adaptativa ao estresse. A atividade desregulada de RBM25 tem sido associada a padrões aberrantes de splicing e à expressão alterada de transcritos relacionados à apoptose e à sinalização, observados em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo a biologia do câncer. Como fator de splicing com amplo impacto no transcriptoma, o RBM25 é frequentemente estudado para mapear redes regulatórias que conectam o processamento de RNA a desfechos fenotípicos.

RBM25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RBM25 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RBM25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RBM25 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RBM25, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RBM25. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RBM25 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RBM25 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RBM25 em células tumorais com expressão de RBM25 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.