Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBM15: sc-417289-ACT

RBM15 (protéine 15 contenant un motif de liaison à l’ARN) est un facteur nucléaire se liant à l’ARN qui régule l’expression génique en contrôlant la maturation du pré‑ARNm et le métabolisme de l’ARNm. Elle est impliquée dans les programmes de différenciation hématopoïétique et participe à des réseaux transcriptionnels et post‑transcriptionnels, notamment via des interactions avec la machinerie épitranscriptomique qui influence les décisions de destinée des ARN. Une activité dérégulée de RBM15 a été associée à des altérations de l’engagement de lignée et à des phénotypes de prolifération, et des réarrangements du gène RBM15 ont été rapportés dans des contextes d’hémopathies malignes, ce qui soutient sa pertinence pour l’étude des circuits transcriptionnels oncogéniques et des voies de régulation de l’ARN.

RBM15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBM15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBM15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBM15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBM15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBM15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBM15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBM15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBM15 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBM15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.