Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RBCK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402044-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RBCK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RBCK1 Double Nickase Plasmid (h) e il RBCK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RBCK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RBCK1 Antibody (E-2): sc-365523
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RBCK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402044-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBCK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402044-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RBCK1 (nota anche come HOIL-1) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che funge da componente centrale del complesso di assemblaggio delle catene lineari di ubiquitina (LUBAC), coordinando eventi di ubiquitinazione legata a Met1 che modellano la segnalazione immunitaria innata e adattativa. Regolando l’attivazione di NF-κB e gli output delle vie infiammatorie a valle di recettori quali TNFR e di alcuni recettori di riconoscimento dei pattern, RBCK1 influenza la produzione di citochine, la sopravvivenza cellulare e le risposte allo stress. RBCK1 partecipa inoltre alla proteostasi e alle vie di controllo qualità tramite reti di segnalazione dell’ubiquitina. La disregolazione dell’attività di RBCK1/LUBAC è stata collegata a fenotipi immunitari e autoinfiammatori ed è stata studiata in contesti che includono immunodeficienza e infiammazione tissutale.
RBCK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RBCK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RBCK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RBCK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RBCK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.