Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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RbAp46 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405076
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RbAp46 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RbAp46, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RbAp46 Antibody (E-9): sc-377197
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RbAp46 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405076 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RBBP7 codifica RbAp46, una proteina legante gli istoni con ripetizioni WD40 che funge da componente centrale di molteplici complessi regolatori della cromatina, tra cui NuRD/HDAC, Sin3A e PRC2, e si associa a CAF-1 durante l’assemblaggio dei nucleosomi. Attraverso queste interazioni, RbAp46 contribuisce a coordinare la deacetilazione degli istoni, il rimodellamento della cromatina e il silenziamento genico epigenetico, influenzando i programmi trascrizionali, l’assemblaggio della cromatina accoppiato alla replicazione del DNA e la stabilità del genoma. Alterazioni della regolazione della cromatina dipendente da RBBP7 sono state collegate a proliferazione deregolata, difetti di differenziamento e fenotipi di risposta allo stress osservati in contesti di cancro e di malattie dello sviluppo. In quanto fattore nodale della cromatina, RbAp46 è spesso studiata nei pathway che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la trascrizione specifica di linea cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RbAp46 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RBBP7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RBBP7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RBBP7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RbAp46.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RBBP7 per lo studio della segnalazione di RbAp46, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RBBP7 critici per la funzione di RbAp46
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RBBP7 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RbAp46 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RbAp46 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RBBP7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RbAp46 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RbAp46 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RBBP7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RBBP7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.