Particules Lentivirales d'Activation (h) RASL11A: sc-409106-LAC

RASL11A code une petite protéine liant le GTP, de type Ras, appartenant à la superfamille RAS, supposée moduler la transduction du signal en couplant le cycle des nucléotides guanyliques à la dynamique des voies en aval. En influençant des commutateurs moléculaires apparentés à Ras, RASL11A est impliquée dans des processus tels que le contrôle de la prolifération, l’organisation du cytosquelette et le trafic associé aux vésicules, qui façonnent l’état cellulaire et la réponse au stress. Des profils d’expression altérés de RASL11A ont été rapportés dans de multiples contextes de cancer et de remodelage tissulaire, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier le recâblage des voies de signalisation oncogéniques et les phénotypes associés à la différenciation. L’étude de la régulation de RASL11A peut donc éclairer la manière dont les réseaux de la famille Ras intègrent des signaux influençant le contrôle de la croissance et la plasticité cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales RASL11A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RASL11A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RASL11A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RASL11A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RASL11A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RASL11A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.