RARα/Retinoic Acid Receptor α Double Nickase Plasmid (h): sc-400529-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RARα/Retinoic Acid Receptor α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RARα/Retinoic Acid Receptor α Double-Nickase-Plasmid (h) und RARα/Retinoic Acid Receptor α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RARA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RARα/Retinoic Acid Receptor α: sc-515796
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RARα/Retinoic Acid Receptor α Double Nickase Plasmid (h) | sc-400529-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RARα/Retinoic Acid Receptor α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400529-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RARA kodiert RARα, einen ligandenaktivierten nukleären Rezeptor, der mit RXR heterodimerisiert, um an Retinsäure-Response-Elemente zu binden und Transkriptionsprogramme zu regulieren, die Zellschicksalsentscheidungen steuern. Über die Retinoid-Signalgebung koordiniert RARα kontextabhängig Prozesse wie die embryonale Entwicklung, die epitheliale Differenzierung, die Zellzykluskontrolle und das Chromatin-Remodeling. Die RARα-Aktivität wird durch die Verfügbarkeit des Liganden und den Austausch von Koregulatoren geprägt und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die die transkriptionelle Repression/Aktivierung und die Festlegung von Zelllinien steuern. Eine Fehlregulation der RARA-abhängigen Transkription und der Rezeptor-Signalgebung wurde sowohl in hämatopoetischen als auch in soliden Geweben mit veränderten Differenzierungszuständen und onkogenen Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für Studien zu Krankheitsmechanismen unterstreicht.
RARα/Retinoic Acid Receptor α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RARA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RARA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RARA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RARA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.