RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400529-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der RARA-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RARα/Retinoic Acid Receptor α: sc-515796
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-400529-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
RARα/Retinoic Acid Receptor α CRISPR Activation Plasmid (h2) | sc-400529-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
RARA kodiert RARα, einen ligandaktivierten nukleären Rezeptor, der mit RXRs Heterodimere bildet, an Retinsäure-Response-Elemente bindet und Transkriptionsprogramme reguliert, die Zellschicksalsentscheidungen steuern. Über retinoide Signalgebung moduliert RARα den Chromatinzustand sowie Gennetzwerke, die Differenzierung, Proliferation und Apoptose kontrollieren, mit starken Bezügen zur hämatopoetischen Reifung und zur epithelialen Entwicklung. Seine Aktivität ist in zentrale transkriptionelle und epigenetische Signalwege eingebunden, einschließlich des Austauschs von Korepressoren und Koaktivatoren sowie Cross-Talk mit MAPK- und PI3K-Signalen. Eine fehlregulierte RARA-Expression oder -Signalgebung ist mit veränderten Differenzierungszuständen assoziiert und wird in der Krebsbiologie sowie in Modellen für Entwicklungsstörungen breit untersucht.
RARα/Retinoic Acid Receptor α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RARA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
RARα/Retinoic Acid Receptor α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RARA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RARA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RARα/Retinoic Acid Receptor α-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RARA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RARα/Retinoic Acid Receptor α-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RARα/Retinoic Acid Receptor α-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RARA-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.