RAPGEF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403816

Descripción general

RAPGEF6 (también conocido como PDZ-GEF2) codifica un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que activa las GTPasas Rap1 y Rap2, conectando las señales iniciadas por receptores con el ciclo de activación/inactivación de pequeñas GTPasas y el reclutamiento de efectores aguas abajo. Mediante el control dependiente de Rap de la señalización “inside-out” de integrinas, la adhesión mediada por cadherinas y la organización del citoesqueleto, RAPGEF6 contribuye a la regulación de la polaridad celular, la migración y la estabilidad de las uniones. Sus dominios PDZ y de asociación a Ras favorecen interacciones de andamiaje que coordinan la señalización en membranas y complejos de adhesión. La desregulación de la señalización RapGEF/Rap se ha implicado en fenotipos alterados de adhesión y motilidad celular relevantes para la biología del cáncer, procesos del neurodesarrollo y el tráfico de células inmunitarias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RAPGEF6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RAPGEF6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RAPGEF6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RAPGEF6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RAPGEF6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RAPGEF6 para la investigación de la señalización de RAPGEF6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RAPGEF6 críticos para la función de RAPGEF6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RAPGEF6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RAPGEF6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RAPGEF6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RAPGEF6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RAPGEF6 (h) y el plásmido HDR RAPGEF6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RAPGEF6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RAPGEF6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.