RAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401709

Übersicht

TERF2IP kodiert RAP1, eine zentrale Komponente des Shelterin-Komplexes, die mit dem telomerischen Repeat-Bindungsfaktor 2 (TRF2) assoziiert ist und dazu beiträgt, Chromosomenenden vor unangemessener DNA-Schadenssignalgebung und End-zu-End-Fusionen zu schützen. Über den Schutz der Telomerenden hinaus trägt RAP1 zur Homöostase der Telomerlänge, zu Replikationsstress-Antworten an Telomeren und zu einer umfassenderen Genomstabilität durch die Koordination von DNA-Reparatur- und Checkpoint-Signalwegen bei. RAP1 wurde zudem mit der transkriptionellen Regulation an außer-telomerischen Stellen in Verbindung gebracht und verknüpft damit die Telomerbiologie mit Chromatin- und Genexpressionsprogrammen. Eine Fehlregulation der TERF2IP/RAP1-Funktion ist relevant für Phänotypen der Telomer-Dysfunktion, genomische Instabilität und Prozesse der zellulären Transformation, wie sie in Krebs- und altersbezogenen Modellen untersucht werden.

Das RAP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TERF2IP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TERF2IP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TERF2IP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RAP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TERF2IP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RAP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TERF2IP-Exone abzielen, die für die RAP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TERF2IP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RAP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RAP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TERF2IP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RAP1 HDR-Plasmid (h) und RAP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TERF2IP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TERF2IP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.