Rap 2B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403292-ACT

RAP2B kodiert Rap2B, eine Ras-verwandte kleine GTPase, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um Signaltransduktion, Membrantransport und die Umgestaltung des Zytoskeletts zu regulieren. Rap2B ist an Signalwegen beteiligt, die mit integrinvermittelter Adhäsion, Vesikeldynamik und MAPK-assoziierten Signalausgängen verknüpft sind und so Zellmigration sowie die zelluläre Reaktionsfähigkeit auf extrazelluläre Reize prägen. In hämatopoetischen und vaskulären Kontexten ist Rap2B eng mit Prozessen der Thrombozytenaktivierung und -sekretion verbunden und unterstützt damit Studien zur Thrombosebiologie und inflammatorischen Signalübertragung. Eine dysregulierte RAP2B-Expression oder -Aktivität wurde in mehreren krankheitsrelevanten Zusammenhängen beschrieben, darunter krebsassoziierte Invasions- und Metastasierungsphänotypen, was RAP2B zu einem hilfreichen Knotenpunkt für die mechanistische Analyse von Signalwegen macht.

Rap 2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAP2B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rap 2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAP2B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAP2B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rap 2B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAP2B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rap 2B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rap 2B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAP2B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.