Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rap 1A (h): sc-400572
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Rap 1A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Rap 1A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rap 1A Antibody (C-10): sc-373968
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rap 1A (h) | sc-400572 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
RAP1A code Rap1A, une petite GTPase de la famille Ras qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de contrôler l’activation « inside-out » des intégrines, l’adhésion cellulaire et le remodelage du cytosquelette. Via des effecteurs tels que RIAM, RapL et des intermédiaires de signalisation MAPK, Rap1A coordonne la dynamique des adhérences focales, la polarité cellulaire et le trafic membranaire, qui influencent la migration et la fonction de barrière. L’activité de Rap1A intègre des signaux issus des voies des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase, et contribue à la régulation des jonctions endothéliales et de l’adhésion des leucocytes. Une dérégulation de la signalisation de RAP1A a été associée à des modifications du comportement prolifératif et invasif dans des modèles de cancer, ainsi qu’à des phénotypes vasculaires et inflammatoires où la signalisation dépendante de l’adhésion est perturbée.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rap 1A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAP1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAP1A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAP1A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rap 1A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAP1A pour l'étude de la signalisation de Rap 1A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de RAP1A essentiels à la fonction de Rap 1A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAP1A pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Rap 1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rap 1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAP1A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Rap 1A plasmide HDR (h) et le Rap 1A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAP1A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAP1A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.