RANTES Double Nickase Plasmid (m): sc-422845-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RANTES Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RANTES Double-Nickase-Plasmid (m) und RANTES Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ccl5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RANTES: sc-365826
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RANTES Double Nickase Plasmid (m) | sc-422845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RANTES Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Ccl5** kodiert **RANTES**, ein Chemokin, das den Leukozytenverkehr koordiniert, indem es an **CCR1**, **CCR3** und **CCR5** bindet und so Chemotaxis, Adhäsion und die Aktivierung von Immunzellen fördert. Die RANTES-Signalübertragung ist in GPCR-abhängige Signalwege eingebettet, die die Aktin-Remodellierung, die Aktivierung von Integrinen und Zytokinnetzwerke regulieren und dadurch inflammatorische Mikroumgebungen in peripheren Geweben prägen. Veränderte **Ccl5**-Expression wird häufig in Modellen chronischer Entzündung, autoimmuner Pathologie, viraler Infektion und Tumor–Immun-Interaktionen untersucht, in denen die Rekrutierung myeloider Zellen und von T-Zellen Krankheitsphänotypen beeinflusst. Als zentraler Vermittler der Positionierung von Immunzellen wird **Ccl5** in Mausmodellen breit eingesetzt, um Immunüberwachung, Gewebeentzündung und den Crosstalk zwischen Stroma und Immunsystem zu untersuchen.
RANTES Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ccl5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ccl5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ccl5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ccl5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.