RANTES CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-422845-KO-2

Übersicht

Maus-Ccl5 kodiert RANTES (CCL5), ein von aktivierten T‑Zellen, NK‑Zellen, Makrophagen und Thrombozyten sezerniertes Chemokin, das über die Signalwege von CCR1, CCR3 und CCR5 die Wanderung von Leukozyten steuert. Die durch RANTES vermittelte Chemotaxis prägt die Rekrutierung entzündlicher Zellen, fördert Interaktionen zwischen Immunzellen und Endothel und koordiniert Zytokinnetzwerke, die Gewebeumbau und antivirale Antworten beeinflussen. Die Ccl5/RANTES‑Aktivität überschneidet sich mit NF‑κB‑ und interferonassoziierten Programmen und kann die Polarisation myeloider Zellen sowie die Lokalisation von Lymphozyten‑Effektorfunktionen modulieren. Eine fehlregulierte Ccl5‑Signalgebung wurde bei Mäusen mit Modellen chronischer Entzündung und Autoimmunität, Neuroinflammation, metabolischer Entzündung sowie mit der Dynamik des Tumor‑Immun‑Mikromilieus in Verbindung gebracht.

Das RANTES CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccl5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccl5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccl5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RANTES-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccl5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RANTES-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ccl5-Exone abzielen, die für die RANTES-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccl5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RANTES CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RANTES CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccl5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RANTES HDR-Plasmid (m) und RANTES HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccl5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccl5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.