Partículas Lentivirales de Activación (h) RANK: sc-400559-LAC

El TNFRSF11A humano codifica RANK (receptor activador de NF-κB), un miembro de la superfamilia de receptores de TNF que transduce señales dependientes de RANKL para regular la diferenciación y supervivencia de los osteoclastos, así como la remodelación ósea. La unión de RANK activa la señalización canónica y no canónica de NF-κB e interseca con las vías MAPK y PI3K/AKT para coordinar programas transcripcionales que controlan la comunicación entre células inmunitarias y la homeostasis tisular. La actividad desregulada de la vía de RANK se ha asociado con trastornos del recambio óseo y microambientes inflamatorios, y se estudia con frecuencia en contextos que vinculan la biología esquelética con la señalización inmunitaria. Como receptor de membrana con una dinámica ligando–receptor bien caracterizada, RANK ofrece un punto de entrada manejable para estudios mecanísticos de la osteoinmunología y de redes génicas impulsadas por NF-κB.

Las partículas de activación lentiviral RANK (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TNFRSF11A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RANK (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TNFRSF11A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RANK. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TNFRSF11A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.