Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Ran Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422594
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Ran El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Ran, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ran Anticuerpo (A-7): sc-271376
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Ran Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422594 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ran (proteína nuclear relacionada con Ras) es una pequeña GTPasa conservada que establece un gradiente de RanGTP/RanGDP a través de la envoltura nuclear para impulsar el transporte nucleocitoplasmático direccional mediante las vías de importinas/exportinas. Más allá de la importación y exportación nuclear, Ran regula el ensamblaje del huso mitótico, la función del centrosoma y la reformación de la envoltura nuclear, acoplando la dinámica del transporte a la progresión del ciclo celular. A través de estas funciones, Ran influye en la regulación transcripcional, la estabilidad del genoma y las respuestas al estrés, que con frecuencia se ven alteradas en trastornos proliferativos y del neurodesarrollo, así como en fenotipos celulares asociados al cáncer. En sistemas murinos, Ran se utiliza ampliamente para investigar mecanismos fundamentales de la mitosis y del transporte nuclear que moldean la diferenciación y la homeostasis tisular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ran (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ran en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ran junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ran tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ran.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ran para la investigación de la señalización de Ran, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ran críticos para la función de Ran
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ran para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Ran CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ran CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ran. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ran (m) y el plásmido HDR Ran (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ran para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ran definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.