Ran BP-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405001-ACT

RANBP3 kodiert Ran BP-3, ein RanGTP-bindendes Protein, das als Kofaktor für den CRM1/XPO1-abhängigen Kernexport fungiert und dabei hilft, die nukleozytoplasmatische Verteilung von Proteinen und RNAs zu regulieren. Durch die Modulation von RanGTP-Gradienten und der Assemblierung von Exportkomplexen trägt Ran BP-3 zur Kontrolle von Genexpressionsprogrammen, Zellzyklusprogression und stressresponsiver Signalübertragung über die Dynamik des nukleären Transports bei. Eine fehlregulierte nukleäre Exportaktivität ist ein wiederkehrendes Merkmal von Krebs sowie anderer proliferativer oder inflammatorischer Zustände, wodurch RANBP3 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien ist, die Transportdefekte mit veränderten transkriptionellen Netzwerken verknüpfen. In menschlichen Zellen wird die gezielte Beeinflussung der RANBP3-Expression häufig genutzt, um die Verbindung zwischen nukleärem Transport, Transkriptionsregulation und Proteostase zu untersuchen.

Ran BP-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RANBP3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ran BP-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RANBP3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RANBP3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ran BP-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RANBP3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ran BP-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ran BP-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RANBP3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.