Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ral B: sc-403971-ACT

Le gène humain **RALB** code **RalB**, une petite GTPase de la superfamille Ras qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de coordonner le trafic vésiculaire, l’exocytose et le remodelage du cytosquelette. RalB agit en aval des RalGEF dans la signalisation apparentée à Ras et interagit avec des effecteurs tels que le complexe exocyste et **RALBP1** pour réguler la dynamique membranaire, la polarité cellulaire et des programmes de réponse au stress. Elle contribue également à la signalisation de l’immunité innée via des voies liées à **TBK1** et à **NF-κB**, influençant les sorties transcriptionnelles inflammatoires. Une activité dérégulée de **RALB** a été impliquée dans des contextes de signalisation oncogénique, où des phénotypes altérés de migration, d’invasion et de survie sont étudiés dans des modèles de biologie tumorale.

Ral B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RALB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ral B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RALB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RALB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ral B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RALB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ral B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ral B dans les cellules tumorales présentant une expression de RALB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.