Rak CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405590

Übersicht

Das menschliche FRK kodiert Rak, eine nichtrezeptorische Tyrosinkinase der BRK-Familie, die Signalübertragung an der Plasmamembran und im Zellkern moduliert. Rak wird mit der Regulation von Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen, der Zytoskelettdynamik und der Zellzykluskontrolle in Verbindung gebracht – über phosphorylierungsabhängige Umstrukturierungen nachgeschalteter Effektoren. Indem die FRK/Rak-Aktivität Proliferation, Differenzierung und zelluläre Stressantworten beeinflusst, wird sie in Kontexten der Epithelbiologie und onkogener Signalnetzwerke untersucht. Eine veränderte FRK-Expression oder Kinaseaktivität wurde mit Änderungen im Verhalten von Tumorzellen und in Signaltransduktionszuständen assoziiert, was ihre Relevanz als mechanistischer Knotenpunkt in krebsbezogenen Signalwegen unterstreicht.

Das Rak CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FRK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FRK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FRK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rak-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FRK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rak-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FRK-Exone abzielen, die für die Rak-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FRK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rak CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rak CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FRK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rak HDR-Plasmid (h) und Rak HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FRK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FRK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.