RAI15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405878

Übersicht

SMYD5 kodiert eine Lysin-Methyltransferase mit SET- und MYND-Domäne, die an der Chromatinregulation und der Kontrolle der Transkription beteiligt ist und kontextabhängige Programme unterstützt, welche Zellidentität und Stressantworten prägen. Durch die Modulation der Histon- und Proteinmethylierung ist SMYD5 mit epigenetischen Signalwegen verknüpft, die DNA-vorlagenbasierte Prozesse beeinflussen, darunter replikationsgekoppelte Chromatinassemblierung und die Dynamik der Genexpression. Eine fehlregulierte SMYD5-Aktivität wurde in mehreren Modellsystemen mit veränderter inflammatorischer Signalgebung und onkogenen Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, was SMYD5 für die Untersuchung von Mechanismen der Tumorprogression und immunbezogener Phänotypen relevant macht. In menschlichen Zellen kann die Analyse SMYD5-abhängiger Netzwerke klären, wie epigenetische Modifikatoren Signale integrieren, um Proliferation und Differenzierung zu steuern.

Das RAI15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SMYD5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SMYD5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SMYD5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RAI15-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SMYD5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RAI15-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SMYD5-Exone abzielen, die für die RAI15-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SMYD5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RAI15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RAI15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SMYD5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RAI15 HDR-Plasmid (h) und RAI15 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SMYD5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SMYD5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.