Rag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427054

概要

Rraga は Rag A をコードしており、Rag A は Ras 関連の小型 GTPase です。RagB/C/D および Ragulator 複合体と協調して、アミノ酸や栄養状態に応答し、リソソーム膜上で mTORC1 をリクルートしてその活性を制御します。ヌクレオチド依存的なヘテロ二量体形成を介して、Rag A は細胞の栄養感知を mTOR 経路によるタンパク質合成、オートファジー、代謝リプログラミングの下流制御へと結び付けます。Rag GTPase シグナル伝達の攪乱は、増殖制御、ストレス応答、免疫細胞の活性化プログラムの変化と関連しているため、Rraga は栄養依存的シグナル伝達ネットワークを研究するうえで有用な入口となります。マウス系では、Rraga を破壊することで、リソソームを中心としたシグナル伝達が生理および疾患関連モデルにおいて転写・翻訳制御とどのように統合されるかを明らかにできます。

Rag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRraga遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rraga内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rragaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rag Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rag Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rraga欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rag Aの機能に不可欠なRragaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rragaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rraga遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rag A HDRプラスミド（m）および Rag A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRragaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRraga標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。