Rag A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411501

Panoramica

RRAGA codifica Rag A, una piccola GTPasi correlata a Ras che forma eterodimeri con RagC/D per collegare la disponibilità intracellulare di amminoacidi all’attivazione di mTORC1 sulla superficie dei lisosomi. Attraverso un ciclo regolato tra gli stati legato a GDP e a GTP e l’interazione con il complesso Ragulator e i regolatori GATOR, Rag A controlla la fosforilazione dei substrati di mTORC1, coordinando la sintesi proteica, la soppressione dell’autofagia e la riprogrammazione metabolica. Una segnalazione deregolata delle GTPasi Rag e un’attività anomala di mTORC1 sono implicate nella biologia del cancro e in contesti di malattie metaboliche e del neurosviluppo, rendendo RRAGA un nodo utile per analizzare i circuiti di rilevamento dei nutrienti. La perturbazione genetica di RRAGA consente studi meccanicistici della segnalazione dipendente dai lisosomi e delle vie a valle di traduzione e autofagia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RRAGA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RRAGA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RRAGA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rag A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RRAGA per lo studio della segnalazione di Rag A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RRAGA critici per la funzione di Rag A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RRAGA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rag A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rag A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RRAGA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rag A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rag A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RRAGA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RRAGA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.