Rag A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411501

Visão geral

RRAGA codifica a Rag A, uma pequena GTPase relacionada à Ras que forma heterodímeros com RagC/D para acoplar a disponibilidade intracelular de aminoácidos à ativação do mTORC1 na superfície lisossomal. Por meio da ciclagem regulada entre estados ligados a GDP e a GTP e da interação com o complexo Ragulator e os reguladores GATOR, Rag A controla a fosforilação de substratos do mTORC1, coordenando a síntese proteica, a supressão da autofagia e a reprogramação metabólica. A sinalização desregulada das GTPases Rag e a atividade aberrante do mTORC1 estão implicadas na biologia do câncer e em contextos de doenças metabólicas e do neurodesenvolvimento, tornando RRAGA um nó útil para dissecar os circuitos de detecção de nutrientes. A perturbação genética de RRAGA permite estudos mecanísticos da sinalização dependente de lisossomos e das vias downstream de tradução e autofagia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rag A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RRAGA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RRAGA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RRAGA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rag A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RRAGA para a investigação da sinalização de Rag A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RRAGA críticos para a função Rag A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RRAGA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rag A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rag A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RRAGA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rag A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rag A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RRAGA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RRAGA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.