RADX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409991

Übersicht

CXorf57 kodiert RADX, einen einzelsträngigen DNA-bindenden Faktor, der die Dynamik von Replikationsgabeln moduliert und während der S‑Phase zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität beiträgt. RADX wirkt der Beladung von RAD51 an gestallten Replikationsgabeln entgegen, beeinflusst dadurch die homologe Rekombination und koordiniert Antworten auf Replikationsstress. Über diese Funktionen trägt es zur Erhaltung der Integrität von Replikationsgabeln, zur Unterdrückung aberranter Rekombination und zur Kontrolle von Signalwegen der DNA-Schadensantwort bei. Eine Fehlregulation der mit RADX verknüpften Balance zwischen Gabelschutz und Reparatur ist relevant für Mechanismen, die den in der Krebsbiologie und in anderen krankheitsassoziierten Modellen von Replikationsstress beobachteten Phänotypen genomischer Instabilität zugrunde liegen.

Das RADX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CXorf57-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CXorf57-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CXorf57 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RADX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CXorf57-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RADX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CXorf57-Exone abzielen, die für die RADX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CXorf57-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RADX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RADX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CXorf57-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RADX HDR-Plasmid (h) und RADX HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CXorf57-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CXorf57-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.